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了解下液相色譜儀的使用

更新時間:2016-10-24      點擊次數(shù):2164
液相色譜儀的使用
1.色譜柱它包括空柱和填料。空柱是內(nèi)壁拋光的不銹鋼管,內(nèi)徑為4~5mm,長100~250mm。按氣相色譜法中洗滌空柱的方法洗凈,用勻漿法填充固定相。將此柱裝入儀器的管路中,用柱式機械往復(fù)泵輸入新鮮脫氣的流動相。等基線平直后可用苯、萘、菲的混合試液,用正己烷(含0.05%甲醇)或甲醇:水(83:17)為流動相測定柱效及分離度塔板數(shù)在2~3萬/ml以上及分離度在1.5以上者,柱效好。為防止柱污染,常用1個50mm長,4~5mm內(nèi)徑,裝有硅膠(40-50mm)或立柱相同填料的保護(hù)柱(預(yù)柱)接在主柱之前,以延長色譜柱的壽命。反相鍵合相柱用畢。必須用水充分流經(jīng),以洗去鹽類、酸堿等雜質(zhì)防止柱生銹及填料中雜質(zhì)的積聚,再用甲醇流經(jīng)洗滌使色譜柱獲得再生。
2.流動相的洗脫方式配好經(jīng)脫氣的流動相放于貯液瓶中,經(jīng)過有濾過頭、內(nèi)徑2mm的聚四氟乙烯管流入高壓泵進(jìn)入色譜柱,zui后自檢測器流出或收集或作廢液回收。用流動相洗脫的方式有恒溶劑脫洗法(isocratic dlution),即自洗脫開始到結(jié)束,溶劑的配比恒定。另一類為梯度洗脫法(gradicnt clution),即使溶劑的極性強度在色譜過程中逐漸增加。須按一定程序不斷改變流動相的濃度配比,從而使同一個試樣中組分性質(zhì)相差較小的及較大的都能在一次色譜過程中很好分離,而整個色譜過程縮短。必須注意,梯度洗脫法不能用于分子排阻色譜及用電化學(xué)檢測的反相液相色譜法中。
3.檢測器適用于血藥濃度的檢測器有紫外線吸收,熒光發(fā)射和電化學(xué)三種。紫外檢測器應(yīng)用于對紫外光有吸收的藥物,大多數(shù)藥物分子對紫外光有吸收,故能較普遍采用,檢測限有0.1μg左右。紫外檢測器有固定波長型、可變波長型及掃描器,既能使流動相停流作組分的定性定量檢測,又能提高測定靈敏度,重現(xiàn)性較好。熒光發(fā)射檢測器對能產(chǎn)生熒光的藥物才能使用。80年代應(yīng)用激光替代氙燈光源,光強度增加了3~4倍,對某些藥物的檢測限可達(dá)pg級。電化學(xué)檢測器是由一個碳糊或破碳做成的蒲層電解池。常用于檢測兒茶酚胺類及有酚類基團(tuán)的各種藥物和代謝物。流出組分進(jìn)入2μl的薄層電解池,在一暄電壓下電解產(chǎn)生電流,放大后檢測,檢測限pg級。
4.?dāng)?shù)據(jù)處理現(xiàn)代液相色譜儀帶有數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),除記錄譜外,還能自動記錄峰的保留時間,能自動積分求算峰面積,并能按照預(yù)定的程序作有關(guān)計算,報告分析結(jié)果。
在液相色譜使用過程中故障排出時要遵守以下原則:一次只改變一個因素,從而確定假定因素與問題之間的;如果通過更換組件來排查故障時要注意將拆下的完好組件裝回原位,從而避免浪費;養(yǎng)成良好的記錄習(xí)慣,一個良好的記錄是成功地進(jìn)行故障排除的關(guān)鍵。
總之,在使用液相色譜時一定要注意樣品的前處理與儀器的正確操作和保養(yǎng),儀器系統(tǒng)的干凈是用好儀器和維護(hù)維修儀器的關(guān)鍵。

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